古琴演奏時，須將七根弦散音調成一定的音階，稱為弦式。大多數古琴曲使用正調弦式，一弦至七弦音名是 C-D-F-G-A-c-d，首調唱名是 sol-la-do-re-mi-sol-la。按十二律，以弦為黃鐘，第三弦為仲呂（作五聲音階的宮音），一弦至七弦音名為「下徵、下羽、宮、商、角、徵、羽」。^[11] ，正調弦式又稱「仲呂均」。而在正調弦式上可以「借調」演奏其他宮調的作品。

為使散音適應不同調的作品和按音音位演奏方便，可以在正調弦式基礎上，通過收緊（「緊」）或放鬆（「慢」）一定的弦數，改變宮音位置和弦間關係，成為新調音階弦式。例如，緊五弦使五弦升高半音，得到C-D-F-G-A_?(B_?)-C-D，稱為無射均弦式。

獨奏定弦時，通常只要校準七弦間的相對音高即可；與其他樂器合奏時，則將正調的五弦定為A（四徽泛音為a1，440Hz）。古琴的定弦法有散音法、按音法、泛音法。

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記譜

主條目：古琴譜

古琴記譜法有文字譜、減字譜，現代的簡譜、五線譜和混合記譜。

最早的記譜法為文字譜，是用文字詳細敘述全部演奏指法動作，因此是一種指法譜。可想而知，文字譜記錄琴曲非常繁瑣。現存僅有的文字譜是唐代的《碣石調·幽蘭》，現收藏於日本東京博物館。

為提高記譜效率，晚唐時出現了簡化文字譜的減字譜。減字譜使用減筆字組合來記錄琴曲的指法、弦序和徽位。清代《大還閣琴譜》開始採用徽分記譜法，將相臨徽間十等分，按音音位記成「幾徽幾分」^[12]，提高了音位準確度。減字譜在傳統琴譜中廣泛採用，並沿用至今。

宋代出現的工尺譜廣泛用於戲曲、古琴音樂等，這種譜可以記錄音高和節奏。 楊宗稷於1911年至1930年的編寫的巨著《琴學叢書》中，將減字譜和工尺譜板眼結合，創製了一種精確的記譜法。 音樂家王光祈的《翻譯琴譜之研究》採用羅馬數字和阿拉伯數字書寫曲譜。

古琴演奏家龔一發明了「古琴五線記譜法」，將記錄實際音高和節奏的五線譜與提示指法的簡化符號結合記錄樂曲。

目前，古琴譜現存有150多部，包含著3000多首流傳下來的古琴曲。這些琴譜原本大都收藏在中國或者別國的公共圖書館里，而目前市場上的琴譜都是影印本或重新裝幀修訂的複製品，而且經常是譯成五線譜或簡譜出售。

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